在一幅画当中，光线的变化不能像在雕塑当中产生那样大的差别。但是在蒙娜丽莎的脸上，微暗的阴影也会时隐时现，而且还为她的双眼与唇部披上了一层神秘的面纱。然而人的笑容主要表现在眼角和嘴角之上，达•芬奇却偏把这些部位画得若隐若现的，由于有十分明确的界线，因此才会有这令人捉摸不定的“神秘的微笑”。

蒙娜丽莎的微笑

荷兰的阿姆斯特丹当中的一所大学应用“情感识别软件”则分析出蒙娜丽莎的微笑之谜当中所包含的内容及比例：高兴占 83％，厌恶占 9％，恐惧占 6％，愤怒则占 2％；哈佛大学神经科专家认为蒙娜丽莎的微笑是与人体的视觉系统有关；约瑟夫博士认为蒙娜丽莎压根就没笑，只是在掩饰自己没长门牙的尴尬；法国脑外科专家觉得蒙娜丽莎得过中风，半个脸的肌肉松弛歪着才会看起来在微笑。

此外，更有英国一位医生则表示蒙娜丽莎是怀孕了脸上流露出满意的表情；一个性学专家称蒙娜丽莎刚刚经历性高潮所以才会出现一种迷人的微笑；比利时安特卫普大学教授认为蒙娜丽莎吃饱了，从嘴角上扬的弧度和手放在腹部的动作就可以看出来。

这已经成为一个世界未解之谜，随着猜测越来越多，猜测的内容也越来越奇葩了，没人知道这个微笑究竟有什么含义，希望未来能够被解答出来。